用途:用于純化水中菌落總數的測定,(EP、USP、Chp標準)
配方:
酵母浸出粉
|
0.5
|
蛋白胨
|
0.5
|
酪蛋白水解物
|
0.5
|
葡萄糖
|
0.5
|
可溶性淀粉
|
0.5
|
磷酸氫二鉀
|
0.3
|
無水硫酸鎂
|
0.024
|
丙酮酸鈉
|
0.3
|
瓊脂
|
15.0
|
pH值7.2 ± 0.2
|
25℃
|
用法:將本品完整包裝放置于100℃沸水中水浴20min~30min,待培養基完全溶解后冷卻至45℃~50℃時,搖勻,備用。
檢驗原理:酵母浸出粉、蛋白胨、酸蛋白水解物提供氮源、維生素、生長因子;葡萄糖、為可發酵糖類;可溶性淀粉可以吸收菌在復蘇過程產生的有害物質;丙酮酸鈉可增強細菌的復蘇。磷酸氫二鉀為酸堿緩沖劑;無水硫酸鎂提供二價陽離子;瓊脂為凝固劑。
不同藥典關于純化水的微生物檢測方法和質量標準
中國藥典
【檢查】 微生物限度 取本品不少于 1ml,按薄膜過濾法處理后,采用 R2A 瓊脂培養基,30~35℃培養不少于 5 天,依法檢查(通則 1105),每1ml 供試品中需氧菌總數不得過 100cfu。
操作簡述:
除葡萄糖、瓊脂外,取上述成分,混合,微溫溶解,調節 pH 值使加熱后在 25℃的 pH值為 7.2±0.2,加入瓊脂,加熱溶化后,再加入葡萄糖,搖勻,分裝,滅菌。 R2A 瓊脂培養基適用性檢查試驗 照通則 1105 中“計數培養基適用性檢查”的胰酪大豆胨瓊脂培養基的適用性檢查方法進行,試驗菌株為銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌。應符合規定。
USP標準
在美國藥典中,推薦使用0.45μm薄膜過濾法,并同時使用高營養培養基(平板計數瓊脂培養基(PCA))于30-35℃培養72小時以上,和低營養培養基(R2A瓊脂)于20-25℃培養96小時以上。檢測標準為:≤100cfu/ml 。
操作簡述:(可根據實際情況調整)
量取10ml充分混勻的水樣,以無菌操作加入安裝好的薄膜過濾器內,過濾。并用 pH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量為100ml,共沖洗1次。過濾后,取出濾膜,正面朝上貼于瓊脂平板上。共制備 2張濾膜,一張濾膜貼于平板計數瓊脂培養基平板(高營養培養基)置30℃~35℃生化培養箱中倒置培養2~3天,計數。另一張濾膜貼于R2A瓊脂平板(低營養培奍基),置20℃~25℃生化培養箱倒置培養5~7天,計數。以培養基平板上菌落數生長較多者作為檢測結果, 按比例折算為1ml純化水中的微生物數量后報告。
EP標準
在歐洲藥典中使用薄膜過濾法(0.45μm 孔徑濾膜),使用 R2A 瓊脂培養基在 30℃~35℃培養 5 天以上。 質量標準:≤100cfu/mL。
操作簡述:(可根據實際情況訓整)
量取 10ml 充分混勻的水樣,以無菌操作加入 安裝好的薄膜過濾器內,過濾。并用 pH7.0 的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜,每張濾膜 每次沖洗量為 100ml,共沖洗 1 次。過濾后,取出濾膜,正面朝上貼于 R2A 瓊脂平板上, 置 30℃~35℃生化培養箱中倒置培養 5 天,計數。按比例折算為 1ml 純化水中的微生物數量后 報告。
微生物靈敏度試驗:
按標簽用法制備培養基,接種以下質控菌株,放置30-35℃需氧培養18-120小時。
R2A瓊脂培養基的原理及應用:http://www.wqsmfhh.cn/asphtml/refere9562.htm