抗人免疫球蛋白熒光抗體

【原理】

  人類感染各種致病微生物后,會針對微生物的抗原成分產生相應的抗體,一般在感染的早期出現IgM類抗體,隨后出現IgG和/或IgA類抗體。有些感染,如梅毒,即使治愈后IgG類抗體也一直維持陽性。檢測人血清中抗微生物抗體是微生物感染實驗室診斷的重要手段。急性感染的早期快速診斷,可以檢測IgM類抗體,隨后可以檢測IgG類和/或IgA類抗體;慢性感染可以檢測IgM和IgG類抗體;恢復期一般可檢測IgG類抗體。在感染過程中,可以根據抗體效價的變化確定感染的診斷或監測抗感染治療的效果。

  檢測人血清中抗體的方法很多,免疫熒光法則是現代抗體檢測技術中最重要的技術之一,尤其在快速檢測技術中占有突出的地位。其基本原理是以熒光素標記各類抗人免疫球蛋白的抗體,檢測時以各種形式的微生物體或其抗原成分固定于玻片上,然后加入待測血清與之反應,人血清中的對應抗體將結合于微生物體或其抗原成分上,隨后即可用熒光素標記的抗人免疫球蛋白抗體將其在熒光顯微鏡下或一定的熒光光度計下顯出,并且可以達到半定量或定量的水平。

【制法】

  (1)從正常健康青壯年人血清中提取γ球蛋白或分別提取IgG、IgM和IgA免疫球蛋白;

  (2)以上述4種球蛋白分別免疫家兔(兔抗人)或羊(羊抗人)或其他合適動物,制備抗人Y球蛋白、抗人IgG(或γ鏈)、抗人IgM(或μ鏈)和抗人IgA(或α鏈)的抗血清;

  (3)從上述抗血清中分別提取免疫球蛋白G(IgG)。以熒光素分別標記上述IgG,分離純化鑒定后即得4種抗人免疫球蛋白熒光抗體。根據需要,可以用兩種熒光素(FITC和TMRITC)分別標記不同的抗人免疫球蛋白，如以 FITC標記抗人IgG,以TMRITC標記抗人IgM,這兩種不同熒光顏色的標記抗體可以混合作雙標抗體染色用。

【用途】

  在微生物學中,主要以間接熒光抗體染色用以檢測人類抗微生物抗體,其作用為:

  (1)急性感染的早期快速診斷。

  (2)慢性感染的血清學輔助診斷。

  (3)療效監測。

  (4)觀察感染過程中抗體效價動力學變化。

  (5)疫苗免疫效果的監測。

  (6)人群對某種傳染病的免疫水平監測。

【注意事項】

  抗人免疫球蛋白熒光抗體是臨床檢驗上最常用的熒光抗體,以全IgG、IgM或IgA為免疫原制備的抗體,各類Ig間輕鏈有交叉反應,故最好以γ鏈、μ鏈為免疫原制備抗血清,否則應將抗輕鏈抗體吸收去除。

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